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麥芽糖結(jié)合蛋白ELISA的方法與以前論文所述一致[1Sj，除了從大腸桿菌中釋放MBP—肽融合蛋白的裂解方法之外。我們發(fā)現(xiàn)，使用商業(yè)性的去垢劑（Pierce公司的B-PER抽提試劑）較溶菌酶能更簡單有效地裂解細(xì)菌細(xì)胞。3ml培養(yǎng)基中的經(jīng)誘導(dǎo)的細(xì)胞先通過沉降，再通過含有0．1mmol/LEDTA的lmlB-PER重懸。于室溫下放置20分鐘后，離心5分鐘以除去細(xì)胞碎片，將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的管中。裂解物于一70~0凍存，當(dāng)用于ELISA反應(yīng)時(shí)按1：50稀釋。在幾個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目中，我們發(fā)現(xiàn)...
1．合成需要的靶標(biāo)DNA或RNA寡核苷酸，其中一組是5’端連接生物素的寡核苷酸鏈。為dsDNA位點(diǎn)合成一條不聯(lián)結(jié)生物素的互補(bǔ)副鏈。2．①對于DNA位點(diǎn)的篩選，將每條寡核苷酸鏈各取10u1，與20/A1的2X核酸退火緩沖液混勻，讓兩條互補(bǔ)的寡核苷酸退火。在PCR儀中以94℃加熱樣品3分鐘，然后以每分鐘2℃的速度冷卻至4℃。冷卻后，用水將溶液稀釋至1pmol/L的終濃度，于-20℃保存。②對于RNA位點(diǎn)篩選，用RNA折疊緩沖液（1XCM）配制1pm01/L的寡核苷酸溶液。將溶液加...
A.噬菌體的制備1．挑取含有源自文庫篩選的噬菌體克隆的單菌落。用滅菌牙簽挑取單菌落接種于滅菌圓底培養(yǎng)板的微孔內(nèi)，其中加有150ul含15ug/ml的四環(huán)素的2×TY培養(yǎng)基。用一個(gè)微孔培養(yǎng)展示野生型DNA/RNA結(jié)合區(qū)域的噬菌體，作為陽性對照。以250r/min的速度小心振蕩微孔板，30℃培養(yǎng)16小時(shí)。2．在合適的吊斗式離心機(jī)中3700g離心96孔培養(yǎng)板15分鐘，以制備噬菌體上清液。將上清液轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的微孔板內(nèi)，4℃保存。B.噬菌體ELISA1，將生物素聯(lián)結(jié)的核酸靶標(biāo)位點(diǎn)（通...
植物體內(nèi)的一種激素脫落酸可幫助植物對抗干旱等惡劣生存條件，但科學(xué)界對這類植物激素的具體作用機(jī)制卻知之甚少。西班牙等國研究人員日前發(fā)現(xiàn)脫落酸幫助植物抗旱的具體機(jī)制，為有效提高植物抗旱能力開辟了新思路。此前研究曾發(fā)現(xiàn)，在正常環(huán)境下，植物體內(nèi)一種名為PP2C的蛋白質(zhì)會阻止脫落酸發(fā)揮作用，當(dāng)植物處于極度干旱條件下時(shí)，這種阻斷作用就會消失，植物細(xì)胞中脫落酸的含量上升，從而幫助植物抗旱。研究同時(shí)認(rèn)為，PP2C蛋白質(zhì)并不會直接作用于脫落酸，而是通過另外一群蛋白質(zhì)間接發(fā)揮作用。這些“中介蛋白...
體外診斷產(chǎn)業(yè)是醫(yī)療器械及醫(yī)藥工業(yè)的一個(gè)組成部分，中國體外診斷產(chǎn)業(yè)是個(gè)新興產(chǎn)業(yè)，共有20二十年左右的發(fā)展歷史，是一個(gè)自發(fā)形成和成長起來的產(chǎn)行業(yè)。體外診斷是指將樣本（血液、體液、組織等）從人體中取出后進(jìn)行檢測進(jìn)而進(jìn)行診斷，是相對于體內(nèi)診斷而言。檢測過程中需要相應(yīng)的儀器和試劑，而這些儀器和試劑就組成了體外診斷系統(tǒng)，從事這些儀器和試劑研發(fā)、生產(chǎn)和營銷的企業(yè)就形成了體外診斷產(chǎn)行業(yè)，它匯集了生物、醫(yī)學(xué)、電子、機(jī)械等相關(guān)技術(shù)。體外診斷產(chǎn)品按檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的檢測項(xiàng)目可分為幾個(gè)主要大類：生化、免疫、...
該系統(tǒng)的主要影響因素是因在蛋白上引入標(biāo)記物可導(dǎo)致蛋白生物活性改變，因?yàn)闃?biāo)記的結(jié)果，本質(zhì)上是制造了一個(gè)由目的蛋白和標(biāo)記物氨基酸序列融合而成新的蛋白。因此，使用該技術(shù)時(shí)，應(yīng)該認(rèn)識到是研究新的蛋白特性，而不是研究蛋白的原來特性。但實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)表明這并不成為很大的問題，通過標(biāo)記蛋白獲得的信息可以采用針對原始未標(biāo)記蛋白的抗體證實(shí)。第二方面的主要影響因素是在進(jìn)行表位標(biāo)記時(shí)，許多目前使用的標(biāo)記物是由已知的蛋白（如myc基因產(chǎn)品）片段組成。這意味著抗標(biāo)記物抗體不僅識別被研究的標(biāo)記蛋白，同時(shí)還可能...
將抗原結(jié)合到抗體微珠基質(zhì)上的zui簡單方法是將微珠裝到一個(gè)層析柱內(nèi)，將抗原溶液流經(jīng)層析柱，當(dāng)抗原流經(jīng)層析柱時(shí)結(jié)合到抗體上而被固定，直到洗脫時(shí)才洗脫下來。這種方法的效率是根據(jù)抗原與固定的抗體之間的接觸時(shí)間決定的，所以抗原抗體之間的作用時(shí)間可以用低流速而延長。這種方法zui大一個(gè)問題就是某些蛋白非特異性結(jié)合到分離柱上，這些蛋白可以出現(xiàn)在洗脫液中，從而使純化效率降低?；|(zhì)本身和抗體基質(zhì)復(fù)合物具有與待檢抗原溶液中蛋白質(zhì)非特異性結(jié)合的表面活性。雖然這些反應(yīng)較正常的抗原—抗體反應(yīng)要弱得多...
淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎（1ymphocyticchoriomeningitis）是由淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒引起的急性傳染病。臨床表現(xiàn)多樣，典型表現(xiàn)為急性無菌性腦膜炎，嚴(yán)重者可出現(xiàn)腦膜腦炎。該病一般為自限性，預(yù)后良好。[病因?qū)W]淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒屬沙粒病毒屬，為RNA病毒，是zui早發(fā)現(xiàn)與人類無菌性腦膜炎相關(guān)的病毒之一。病毒先侵入呼吸道上皮細(xì)胞繁殖，然后進(jìn)入血液循環(huán)致病毒血癥，此期可通過血腦脊液屏障而致腦膜、脈絡(luò)叢有淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤，腦實(shí)質(zhì)水腫等病變。[實(shí)驗(yàn)室診斷]...
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